ⅠNukleinsäureiEinführung
Nukleinsäure wird in Desoxyribonukleinsäure (DNA) und Ribonukleinsäure (RNA) unterteilt, wobei RNA entsprechend ihren unterschiedlichen Funktionen in ribosomale RNA (rRNA), Messenger-RNA (mRNA) und Transfer-RNA (tRNA) unterteilt wird.DNA ist hauptsächlich im Zellkern, in den Mitochondrien und im Chloroform konzentriert, während RNA hauptsächlich im Zytoplasma verteilt ist.Als materielle Grundlage der Genexpression spielt die Nukleinsäureextraktion eine äußerst wichtige Rolle in der molekularbiologischen Forschung und der klinischen Molekulardiagnostik.Die Konzentration und Reinheit der Nukleinsäureextraktion wirken sich direkt auf die anschließende PCR, Sequenzierung, Vektorkonstruktion, Enzymverdauung und andere Experimente aus.
Ⅱ Verfahren zur Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren
① Phenol/Chloroform-Extraktionsmethode
Die Phenol/Chloroform-Extraktion ist eine klassische Methode zur DNA-Extraktion, bei der hauptsächlich zwei verschiedene organische Lösungsmittel zur Behandlung der Proben verwendet werden, wobei DNA-basierte Nukleinsäure in der Wasserphase, Lipide in der organischen Phase und Proteine zwischen den beiden Phasen gelöst werden.Diese Methode bietet die Vorteile geringer Kosten, hoher Reinheit und guter Wirkung.Die Nachteile sind komplizierte Bedienung und lange Zeit.
② Trizol-Methode
Die Trizol-Methode ist eine klassische Methode zur RNA-Extraktion.Die Trizol-Methode wird nach der Zentrifugation mit Chloroform in eine wässrige Phase und eine organische Phase unterteilt, in der die RNA in der wässrigen Phase gelöst wird, die wässrige Phase in ein neues EP-Röhrchen überführt wird, nach Zugabe von Isopropanol eine Ausfällung erfolgt und anschließend eine Ethanolreinigung erfolgt.Diese Methode eignet sich zur RNA-Extraktion aus tierischen Geweben, Zellen und Bakterien.
③ Zentrifugalsäulen-Reinigungsmethode
Die Zentrifugensäulen-Reinigungsmethode kann DNA spezifisch durch spezielle Siliziummatrix-Adsorptionsmaterialien adsorbieren, während RNA und Protein reibungslos passieren können. Anschließend werden Nukleinsäuren mit hohem Salzgehalt und niedrigem pH-Wert kombiniert und die Nukleinsäure wird durch Elution mit niedrigem Salzgehalt und hohem PH-Wert abgetrennt und gereinigt.Die Vorteile sind hohe Reinigungskonzentration, hohe Stabilität, kein Bedarf an organischem Lösungsmittel und niedrige Kosten.Der Nachteil besteht darin, dass die Zentrifugation Schritt für Schritt erfolgen muss und mehr Arbeitsschritte erforderlich sind.
④ Magnetperlen-Methode
Bei der Magnetkügelchen-Methode wird die Zellgewebeprobe durch das Lysat gespalten, die Nukleinsäure in der Probe freigesetzt und anschließend werden die Nukleinsäuremoleküle spezifisch an der Oberfläche des Magnetkügelchens adsorbiert, während Verunreinigungen wie Proteine und Zucker darin zurückbleiben die Flüssigkeit.Durch die Schritte der Zellgewebespaltung, der magnetischen Perlenbindung mit Nukleinsäure, des Nukleinsäurewaschens, der Nukleinsäureelution usw. wird schließlich reine Nukleinsäure erhalten.Die Vorteile liegen in der einfachen Bedienung und der kurzen Einsatzzeit, ohne dass eine Stufenzentrifugation erforderlich ist.Es stellt geringe technische Anforderungen und kann einen automatischen und Massenbetrieb realisieren.Durch die spezifische Kombination aus Magnetkügelchen und Nukleinsäure erhält die extrahierte Nukleinsäure eine hohe Konzentration und Reinheit.Der Nachteil besteht darin, dass der aktuelle Marktpreis relativ teuer ist.
⑤ Andere Methoden
Zusätzlich zu den oben genannten vier Methoden gibt es das Siedecracken, die Methode mit konzentriertem Salz, die Methode mit anionischem Reinigungsmittel, die Ultraschallmethode und die enzymatische Methode usw.
Ⅲ Art der Nukleinsäureextraktion
Foregene verfügt über die weltweit führende Direct-PCR-Plattform, eine Doppelsäulen-RNA-Isolierungsplattform (nur DNA + nur RNA).Zu den Hauptprodukten gehören DNA/RNA-Isolierungskits sowie molekulare Laborreagenzienserien für PCR- und Direkt-PCR-Reagenzien.
① Gesamt-RNA-Extraktion
Zu den Gesamt-RNA-Extraktionsproben gehören Blut, Zellen, tierische Gewebe, Pflanzen, Viren usw. Durch die Gesamt-RNA-Extraktion kann eine hohe Reinheit und hohe Konzentration der Gesamt-RNA erhalten werden, die bei RT-PCR, Chip-Analyse, In-vitro-Translation, etc. verwendet werden kann. molekulares Klonen, Dot Blot und andere Experimente.
Foregene-bezogenRNA-Isolierungskits
Tier-Gesamt-RNA-Isolierungskit--Extrahieren Sie schnell und effizient hochreine und hochwertige Gesamt-RNA aus verschiedenen tierischen Geweben.
Zell-Gesamt-RNA-Isolierungskit--Aus verschiedenen kultivierten Zellen kann in 11 Minuten hochreine und hochwertige Gesamt-RNA gewonnen werden.
Kit zur Isolierung pflanzlicher Gesamt-RNA--Extrahieren Sie schnell hochwertige Gesamt-RNA aus Pflanzenproben mit niedrigem Polysaccharid- und Polyphenolgehalt.
Virales RNA-Isolierungskit--Schnelle Isolierung und Reinigung viraler RNA aus Proben wie Plasma, Serum, zellfreien Körperflüssigkeiten und Zellkulturüberständen.
② Genomische DNA-Extraktion
Genomische DNA-Extraktionsproben umfassen Boden, Fäkalien, Blut, Zellen, tierisches Gewebe, Pflanzen, Viren usw. Die genomische DNA-Extraktion kann bei der Enzymverdauung, dem Aufbau einer DNA-Bibliothek, der PCR, der Antikörpervorbereitung, der Western-Blot-Hybridisierungsanalyse, dem Gen-Chip usw. verwendet werden -Durchsatzsequenzierung und andere Experimente.
Foregene-bezogenDNA-Isolierungskits
DNA-Isolierungskit für Tiergewebe--Schnelle Extraktion und Reinigung genomischer DNA aus mehreren Quellen, wie z. B. tierischen Geweben, Zellen usw.
Blut-DNA-Midi-Kit (1–5 ml)--Reinigen Sie schnell hochwertige genomische DNA aus antikoaguliertem Blut (1–5 ml).
DNA-Isolierungskit für Wangenabstrich/FTA-Karte--Reinigen Sie schnell hochwertige genomische DNA aus Mundschleimhautabstrich-/FTA-Kartenproben.
Pflanzen-DNA-Isolierungskit--Schnelle Reinigung und Gewinnung hochwertiger genomischer DNA aus Pflanzenproben (einschließlich Polysaccharid- und Polyphenol-Pflanzenproben)
③ Plasmidextraktion
Plasmid ist eine Art zirkuläres kleines DNA-Molekül in Zellen, das ein häufiger Träger für die DNA-Rekombination ist.Die Methode der Plasmidextraktion besteht darin, RNA zu entfernen, Plasmid von bakterieller genomischer DNA zu trennen und Protein und andere Verunreinigungen zu entfernen, um relativ reines Plasmid zu erhalten.
Allgemeines Plasmid-Mini-Kit--Reinigen Sie schnell hochwertige Plasmid-DNA aus transformierten Bakterien für routinemäßige molekularbiologische Experimente wie Transformation und Enzymverdau
④ Andere Extraktionsarten, miRNA-Extraktion usw.
Tier-miRNA-Isolierungskit- Extrahieren Sie schnell und effizient kleine RNA-Fragmente von 20–200 nt miRNA, siRNA und snRNA aus verschiedenen tierischen Geweben und Zellen
Ⅳ Anforderungen an die Extraktion und Reinigung von Nukleinsäurens
① Um die Integrität der Primärstruktur der Nukleinsäure sicherzustellen.
② Reduzieren Sie die Interferenz von Proteinen, Zuckern, Lipiden und anderen Makromolekülen
③ In Nukleinsäureproben dürfen kein organisches Lösungsmittel oder hohe Konzentrationen an Metallionen vorhanden sein, die das Enzym hemmen können.
④ RNA- und andere Nukleinsäurekontaminationen sollten bei der DNA-Extraktion eliminiert werden und umgekehrt.
Zeitpunkt der Veröffentlichung: 24. November 2022
